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微液滴数字PCR平台


独特的产品优势
1加样体积可调   加样体积在20-50μL内可调,更多加样量,意味着更高灵敏度
2样品数量灵活   每张芯片可处理1 -8个样本,灵活可调,节省试剂耗材
3微滴数多       30μL样本可制备约5万个均一稳定的纳升级液滴,线性范围广,为0-30万拷贝/样本。
4微滴无需转移      全封闭体系,操作简单,微滴生成后无需转移,减少微滴损失
5封闭检测          检测时机器封闭运行,确保PCR产物不暴露在空气中,防止气溶胶污染和样本损失,预防假阳性
6单独加样           每个样本独立加样控制,避免样本间交叉污染
7信噪比高       相比成像方法,基于PMT进行信号检测,容易判读,结果准确


检测流程

液滴制备(5分钟)+ PCR扩增(1.5小时)+ 检测分析(25分钟)= 2小时
 
数字PCR十大应用
1基因表达差异研究  
数字PCR可以提供比实时荧光定量PCR更精确的基因差异表达研究,尤其对于那些靶基因表达差异微小的情况,如:mRNA、microRNA、 IncRNAs等的表达分析;等位基因的不平衡表达;单细胞基因表达分析;外泌体核酸分子定量分析等
2低丰度DNA模板分子的精确定量
由于绝大部分微液滴中只含单个或不含模板分子,使得低丰度DNA模板分子的扩增不受高丰度模板分子扩增的竞争抑制,与此同时,样本中可能存在的抑制剂也在分配到微液滴的过程中进行了相对稀释,作用于单个微液滴内模板扩增的抑制剂数量大幅降低,从而提高PCR扩增对抑制剂的耐受程度,因此可应用于诸多临样本(如血液、尿液、粪便、痰液、胸腹水、 脑脊液等)中痕量核酸标记物的检测。一般而言, 定量PCR的检测灵敏度约在1%, NGS的灵敏度可达到1%,而数字ECR的检测下限可轻松实现0.01%
3拷贝数变异(CNV)研究
数字PCR直接读取阳性信号,通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数,为拷贝数变异的研究提供了绝对的检测精度。采用数字PCR能够有效对二代测序(NGS)和微阵列比较基因组杂交(aCGH)等实验结果进行验证,并具有 检测周期短、成本低、样本通量高等特点
4甲基化含量鉴定
传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序法、抗体检测法、定量PCR检测法等受限于方法学的问题,不能获得甲基化程度的精确定量,而数字PCR 系统通过对样本的微液滴处理及目标分子的绝对拷贝数定量,为甲基化程度的精确定量检测提供了一种可靠的技术
5二代测序辅助建库
目前靶向测序建库方法包括扩增子方法,在均相溶液中,当扩增引物增加时,由于扩增引物之间的相互作用,从而影响扩增的效率;如果将其分散到大量微液滴中扩增,将可大大降低引物间相互作用,提高扩增效率。同时还可以实现对于少量模板的有效扩增,得到更多的有效测序数据
6 CRISPR-Cas9基因编辑结果验证
CRISPR-Cas9技术的发明,是基因编辑技术的 一大突破,但如何验证实验是否成功,仍需要 高灵敏度的检测方法,数字PCR技术可以满足这一需求。Broad研究所张锋团队发明了以 CRISPR为基础的SHERLOCK技术可以对核酸 进行高灵敏度的定性检测,但精确定量评估时 仍采取了数字PCR进行确认
7无创产前筛查
唐氏综合征、地中海贫血或胎儿遗传性耳聋基因检测等,目前无创检测标本来源主要为孕妇 血液,检测胎儿DNA会受到母体DNA的干扰, 依靠数字PCR可提高检测准确性。对比NGS, 数字PCR技术可以提高工作效率、降低检测成本
8微生物(病毒、细菌等)的检测
疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室可以将基于TaqMan探针法的定量PCR体系无缝地转移到数字PCR上,从而满足该类实验室对于检测结果的要求:灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的绝对定量结果
9肿瘤治疗的伴随诊断
常用体液来源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等) 的待检标本中的DNA,有正常脱落体细胞和病变脱落细胞两种来源,前者的量远大于后者。通过微液滴处理能在每个微液滴中有效减少正常体细胞DNA的干扰,实现肿瘤标记物的有效检测,如 EGFR, ALK, ROS1, KRAS、BRAF 等 基因的突变检测、乳腺癌/胃癌的HER2基因扩增检测等,应用于肿瘤精准医学的伴随诊断
10移植排斥监控
接受肝脏移植的患者,目前用于检测器官排斥反应的常规方法是监测患者血液中的生化指标异常,一般情况下超过50%的移植器官功能已经丧失。新的研究表明通过对七例术后移植患 者的移植物游离DNA进行数字PCR检测,更早发现了两例发生排斥反应的患者,取得了令人 满意的结果






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